Международная научно-практическая конференция «Экспериментальная и клиническая фармакология» (27-28 сентября 2011 года, г. Гродно, Республика Беларусь, отв. ред. П.С.Пронько). – Гродно: ГрГМУ, 2011. – С. 98-102.

 

Следствием технического прогресса явилось ускорение темпа жизни, информационная перегрузка, преобладание у значительной части населения умственного труда, что в конечном итоге приводит не только к нервному перенапряжению и связанному с ним стойкому нарушению функций центральной нервной системы (ЦНС), но и вызывает нарушения мозговой деятельности, когнитивные расстройства (ослабление таких функций, как внимание, память, способность к оценке и анализу ситуации, к принятию решений, пространственная ориентация), болезни сердечно-сосудистой системы.

α-липоевая кислота является одним из самых сильных антиоксидантов, используемых в лечении нейропатии [1]. На экспериментальных моделях ишемии мозга выявлены ее защитные свойства: снижение концентрации малонового диальдегида – основного биохимического маркера ишемического повреждения; повышение активности основного фермента физиологической антиоксидантной системы – супероксиддисмутазы; увеличение общего уровня антирадикальной активности на фоне повышения показателя выживаемости животных [2]. В клинической практике продемонстрирована эффективность α-липоевой кислоты в качестве адъювантного лечения в острейшем (1-5-е сутки) и раннем восстановительном периодах ишемического инсульта [3].

Надежно доказаны противоишемический, антигипоксический и противоотечный эффекты экстракта гинкго. Установлена его способность предупреждать неврологические дефекты, отек головного мозга и смерть вследствие церебральной ишемии [4]. В опытах in vitro было показано, что стандартизированный экстракт гинкго обладает противоапоптозным действием. Добавление как всего экстракта, так и отдельных его компонентов (флавоноидов, гинкголидов, билобалида) к культурам нервных клеток увеличивало их жизнеспособность и снижало как спонтанно встречающийся, так и индуцированный окислительным повреждением апоптоз [5].

Ацильные производные карнитина, из которых наиболее широко изучен N-ацетил-L-карнитин, выполняют важнейшую функцию в организме человека. Они переносят остатки жирных кислот из цитоплазмы в матрикс митохондрий для образования энергии, которая необходима для функционирования всех клеток, тканей и систем организма [6]. N-ацетил-L-карнитин вносит существенный вклад в митохондриальный синтез ATФ, являясь кофактором ключевых митохондриальных белков. Полагают, что нейропротекторное действие N-ацетил-L-карнитина реализуется, прежде всего, через его влияние на митохондриальные процессы [7].

Комбинация антиоксидантов - гинкго билоба, α-липоевая кислота, N-ацетил-L-карнитин - характеризующаяся различными механизмами действия на организм, может обусловливать их взаимодополняющий эффект с возникновением аддитивного или синергетического эффекта.

Разработка новой фармацевтической композиции, включающей в себя экстракт гинкго, α-липоевую кислоту, N-ацетил - L-карнитин, является актуальной, поскольку позволяет расширить сферу фармацевтических продуктов, применяемых категориями лиц с нарушенным обменом веществ, пониженной умственной и физической работоспособностью, лиц пожилого и старческого возраста.

В связи с вышесказанным, в Отделе поведенческой фармакологии ИФБ НАН Беларуси разработано комбинированное средство «НООТРИЦИН®» на основе вышеперечисленных компонентов. БАД «НООТРИЦИН®» в экспериментах на неполовозрелых спонтанно гипертензивных крысах линии SHR (экспериментальная модель синдрома дефицита внимания/гиперактивности) статистически значимо облегчает процессы неассоциативного обучения (ультракраткосрочная память) и проявляет антиамнестическую активность в отношении условной реакции пассивного избегания, нарушенной максимальным электрошоком [8].

Для характеристики соответствия фармпродукта установленным нормам необходим подбор адекватных методов контроля качества БАД «НООТРИЦИН®».

Целью исследования является разработка физико-химических и микробиологических методов контроля качества БАД «НООТРИЦИН®» и оценка качества готового фармацевтического продукта.

Методы исследования. В исследованиях использованы твердые желатиновые капсулы «НООТРИЦИН®» (0,35 г) с. 010810, 010111, наработанные в Экспериментально-внедренческом отделе ИФБ НАН Беларуси.

Для разработки методов контроля качества руководствовались требованиями Государственной Фармакопеи Республики Беларусь (ГФ РБ), Британской Фармакопеи (BP, 2007), Американской Фармакопеи (USP, 2006) и др. [9, 10, 11]. Использовали технические нормативные правовые акты (ТНПА), регламентирующие качество БАД в соответствии с требованиями, установленными в Республике Беларусь. Контроль качества БАД осуществляли по следующим характеристикам: органолептические показатели (внешний вид капсул, внешний вид и запах содержимого капсул); физико-химические показатели БАД (отклонение средней массы содержимого капсул от номинальной массы содержимого капсулы, количество капсул с отклонениями массы содержимого капсул более 7,5% от средней массы содержимого капсул, количество капсул с отклонениями массы содержимого капсул более 15% от средней массы содержимого капсул, распадаемость, содержание флавоноидов в пересчете на флавоновые гликозиды, содержание гинкголида В, содержание N-ацетил-L-карнитина, содержание α-липоевой кислоты);  микробиологические показатели (КМАФАнМ, КОЕ/г, дрожжи, КОЕ/г, плесень, КОЕ/г; бактерии Salmonella, бактерии Escherichia coli, БГКП (колиформы), бактерии Staphylococcus aureus, В. cereus, КОЕ/г).

Определение органолептических показателей проводили в соответствии с ГОСТ 8756.1-79. Для определения физико-химических характеристик БАД использовали методы, рекомендованные ГФ РБ: определение распадаемости капсул (ГФ РБ, т. 1, п.2.9.1), количественное определение содержания биологически активных веществ (БАВ) в БАД с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (ГФ РБ, т. 1, п. 2.2.29). Микробиологические показатели определяли в соответствии с требованиями ГОСТ 10444.2-94, ГОСТ 10444.8-88, ГОСТ 10444.12-88, ГОСТ 10444.15-94, ГОСТ 30518-97, ГОСТ 30519-97, ГОСТ 30726-2001.

Результаты исследования. С целью анализа качества БАД «НООТРИЦИН®» разработаны и утверждены TУ BY 500043647.013-2010.

Оценивали соответствие капсул БАД «НООТРИЦИН®» требованиям TУ BY 500043647.013-2010. По показателю «Органолептические показатели» БАД соответствовал установленным требованиям: фармпродукт представлял собой твердые желатиновые капсулы, размер №0, с белым корпусом и зеленой крышечкой, с содержимым капсул - смесью порошка и гранул от коричневато-желтого до светло-желтого цвета, с вкраплениями от светло-коричневого до темно-коричневого цвета, со специфическим запахом, с комочками размером 0,5-1 мм.

Физико-химические показатели БАД отвечали установленным требованиям. Так, отклонение средней массы содержимого капсул от номинальной массы содержимого капсулы было в пределах заложенных в TУ BY параметров, т. е. не превышало ±7,5%, число капсул с отклонениями массы содержимого капсул более 7,5% от средней массы содержимого капсул не превышало 2, капсулы с отклонениями массы содержимого капсул более 15% от средней массы их содержимого отсутствовали. Распадаемость капсул  не превышала 30 минут. Количественное содержание  флавоноидов в пересчете на флавоновые гликозиды было не менее 0,5 мг, содержание гинкголида В - не менее 0,15 мг, содержание N-ацетил-L-карнитина – в пределах 85-115 мг, содержание α-липоевой кислоты – в пределах 21,25-28,75 мг в пересчете на одну капсулу.

По микробиологическим показателям капсулы БАД «НООТРИЦИН®» отвечали установленным нормам: КМАФАнМ, КОЕ/г не более 10 000, дрожжи, КОЕ/г не более 100, плесень, КОЕ/г не более 100, бактерии Salmonella в 10 г продукта отсутствовали, бактерии Escherichia coli в 1 г продукта отсутствовали, БГКП (колиформы) в 0,1 г продукта отсутствовали, бактерии Staphylococcus aureus в 1 г продукта отсутствовали, В. cereus, КОЕ/г не более 2×102.

Фармацевтический анализ БАД «НООТРИЦИН®» с. 010810, с. 010111 непосредственно после наработки фармацевтического продукта показал его соответствие требованиям TУ BY 500043647.013-2010. Дополнительно проведен химико-фармацевтический анализ БАД «НООТРИЦИН®» вышеуказанных серий со сроком хранения 3 и 6 месяцев в условиях, регламентированных НТД (в сухом месте, при температуре от 15ºС до 25ºС). По органолептическим и физико-химическим показателям БАД «НООТРИЦИН®» с. 010810 и с. 010111 соответствуют требованиям TУ BY 500043647.0133-2010 (Таблица).

 

Таблица. Динамика содержания БАВ и активных компонентов в капсулах БАД «НООТРИЦИН®» (с. 010810, 01011).

 

Показатели

Требования TY BY

3 мес.

6 мес.

Содержание флавоноидов в пересчете на флавоновые гликозиды,

мг, не менее

 

0,5

 

5,49

 

2,12

Содержание гинкголида B,

мг, не менее

0,15

0,24

0,156

Содержание N-ацетил – L-карнитина,

мг, не менее

 

85-115

 

106,9

 

103,17

Содержание α-липоевой кислоты,

 мг, не менее

 

21,25-28,75

 

22,66

 

23,07

 

Заключение. Разработаны физико-химические и микробиологические методы контоля качества БАД «НООТРИЦИН®», включенные в TУ BY 500043647.013-2010. Анализ БАД «НООТРИЦИН®» со сроком хранения 0, 3 и 6 месяцев показал их соответствие требованиям TУ BY 500043647.013-2010.

 

Список литературы.

1. Аметов  А.C. Антиоксидантная терапия диабетической полинейропатии / А. С Аметов, И. А. Строков, Р. Самигуллин // РМЖ. - 2005. - Т. 13, № 6. - С. 339–43.

2. Packer  L. Neuroprotection dy the metabolic antioxidant alpha-lipoic acid / L. Packer  [et al] // Free Radicals Biol. Med. – 1997. - №22. – Р. 359-378.

3. Гехт А.Б. Антиоксидантная терапия в неврологической практике / А.Б. Гехт [и др.] // Здоров'я України. – 2006. – № 17. – С. 27-28.

4. Лиманова О. А. Цереброваскулярные, ренальные эффекты билобила и его влияние на металлолигандный гомеостаз (клинико-экспериментальное исследование) /

О. А. Лиманова [и др.] // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2002. - №6. - С. 28–31.

5. Штрыголь С. Ю., Штрыголь Д. В., Назаренко М. Е. Стандартизированный экстракт Ginkgo biloba: компоненты, механизмы действия, фармакологические эффекты, применение // Провизор.- 2005.- №4.- С. 76–79.

6. Bremer J. Carnitine-metabolism and functions / J. Bremer // Physiol. Rev. - 1983. - №63. – P. 1420-80.

7. Bagetta V. Acetyl-l-Carnitine selectively prevents post-ischemic LTP via a possible action on mitochondrial energy metabolism // V. Bagetta, I. Barone, V, Ghiglieri // Neuropharmacology. – 2008. - Vol. 55. - №2 - P. 223-9.

8. Кравченко Е.В., Понтелеева И.В., Петров П.Т. Исследование влияния БАД «Ноотрицин» на выработку условной реакции пассивного избегания у крыс линии SHR // Материалы Междунар. Научно-практической конф. «Белорусские лекарства», Минск, Беларусь.- 2010. – С.116-118.

9. Государственная Фармакопея Республики Беларусь // Ред. Годовальников Г.В. 1-3 тт. Молодечно. - 2009.

           10. United States Pharmacopeia. – 31-th Ed. – Rockville: United States Pharmacopeial Convention, Inc. - 2008. – 2105 p.

11. British Pharmacopoeia 2007 Incorporating the Requirements of the 5 Edition of the European Pharmacopoeia 1997 as amended by Supplement 2007. – System Simulation Ltd. -2007. – 1680 p.

 

 

USE OF PHYSICO-CHEMICAL AND MICROBIOLOGICAL METHODS FOR THE ANALYSIS OF THE COMBINED NUTRACEUTICAL «NООTRITSIN®» BASED ON GINKGO BILOBA, α -LIPOIC ACID, N-ACETYL-L-CARNITINE

 

Кravchenko E.V., Demid D. I., Mashko E.V., Kvasiuk A. A., Fatykhava S. А.,

Shabunya P. S., Kurman P.V., Kazyuchits O. A., Mar’yankova R. F., Petrov P.T.

 

State Research and Innovation Centre «Institute of Pharmacology and Biochemistry

 of the National Academy of Sciences of Belarus»

 

The physico-chemical and microbiological methods of contol of quality of nutraceutical "NOOTRITSIN®», included in TS BY 500043647.013-2010. Analysis of nutraceutical "NOOTRITSIN®» with a shelf life of 3, 6 and 0 months showed compliance with TS BY 500043647.013-2010.

 

EN-US align=